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羊棘球蚴（包蟲）病ELISA抗體檢測試劑盒
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產品編號
所屬分類
試劑盒類
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詳細信息
參數
羊棘球蚴(包蟲)ELISA抗體檢測試劑盒 Indirect ELISA Kit For Echinococcus Granulosus
使用說明書
【簡 介】
試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標二抗及其它試劑制成，應用間接ELISA法檢測羊血清中抗羊棘球蚴(包蟲)主要保護性抗原Eg95蛋白的抗體。
【用 途】
適用于養殖場及檢驗機構對羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗免疫效果的評價。
【原 理】
本試劑盒是采用棘球蚴主要保護性抗原EG95包被微孔板。在試驗中，若待測血清樣品中含有抗棘球蚴的特異性抗體，則將與檢測板上抗原結合形成抗原—抗體復合物。之后加入的酶標二抗將與檢測板上的抗原—抗體復合物發生特異性結合，再加入TMB底物溶液后形成藍色產物。顯色反應經終止液終止后呈黃色，最終通過測定450nm波長下吸光度即可得到結果。
【試劑盒主要成分】
|
【樣品制備】
取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【試劑配制】
使用前，試劑盒內除酶標二抗外的各種試劑都應恢復到室溫（25?C左右）。25倍濃縮的洗滌液恢復至室溫或略微加熱后搖動使沉淀的鹽溶解，然后用去離子水作25倍稀釋，稀釋好的洗滌液在2～8?C可以存放7天。酶標二抗在使用前用樣品稀釋液按1:100倍稀釋，現配現用。
【樣品稀釋】
標準樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按1:50倍的體積稀釋（推薦稀釋方法：245μL樣品稀釋液中加5
待檢血清樣品）。
【操作步驟】
1、取抗原包被板，先加入50μL樣品稀釋液，再將稀釋好的待檢樣品和對照樣品各取50μL加入到抗原包被板孔中，用移液器輕輕吹打混勻。陰性對照和陽性對照各設2孔，置37?C溫育30分鐘。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀釋好的 酶標二抗100μL，置37?C溫育30分鐘。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等體積混合好的底物溶液A 與底物溶液B 100μL ，避光顯色10分鐘。
6、每孔加終止液50μL，10分鐘內測定450nm波長吸光度。
【結果判定】
參考農業部關于印發《2013年國家動物疫病強制免疫計劃》的通知，被檢抗體正向間接血凝實驗抗體效價≥25為陽性。根據該通知制定結果判定標準：
1 實驗結果同時滿足下列條件，方為有效：
標準陽性對照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
標準陰性對照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗體水平檢測結果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為細粒棘球蚴(包蟲)抗體陰性。
樣品OD450nm＞0.3，判為細粒棘球蚴(包蟲)抗體陽性。
樣品OD450nm處于0.3±0.02臨界值范圍內，建議重復檢測，以確保結果準確。
3 對細粒棘球蚴(包蟲)免疫保護力檢測結果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為無保護力，所檢樣品對細粒棘球蚴(包蟲)感染無保護力。
樣品OD450nm介于0.3與0.6之間，判為保護力低下，抗體水平較低，對細粒棘球蚴(包蟲)感染有一定保護力。
樣品OD450nm≥0.6，判為有保護力，所檢樣品抗體水平較高，在攻毒試驗中可提供高于90%的抵抗力。
樣品OD450nm處于0.3±0.02或者0.6±0.02兩個臨界值范圍內，建議重復檢測，以確保結果準確。
【注意事項】
1 本底過高可導致結果整體水平偏高，實驗過程需保證二抗清洗干凈，或實驗中添加空白對照。
2 環境溫度低于15?C可導致結果整體水平偏低，實驗過程需保證環境溫度盡量接近25?C，或適當延長底物液顯色時間。
3 底物液A和底物液B不要暴露于強光，避免接觸氧化劑。
4 濃縮洗滌液用去離子水稀釋，如果發現有結晶，應水浴加熱使其溶解。
5 酶標二抗應現配現用。
6 4?C過夜孵育樣品及酶標二抗可以獲得更好的結果。
【貯 存】 2～8?C避光保存
【有 效 期】 9個月
【生產企業】 重慶澳龍生物制品有限公司
【地 址】 重慶市榮昌縣昌元鎮昌州大道東段板橋四支路3-03
【郵 編】 402460
【技術服務】 023-85261707
【銷售熱線】 023-85261703（傳真）
關鍵詞:
抗體
樣品
稀釋
結果
血清
od450nm
抗原
底物
檢測
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